液体菌种的制作

1.液体菌种生产关键技术

1、溶解氧

液体菌种生产最关键的是培养基中溶氧量的多少，因为菌丝在生长过程中，必须不断吸收溶氧以维持自身的新陈代谢。液体（水）中溶氧量与压力和温度有关，与培养基的接触面积和渗透压有很大关系。

2、空气过滤

该技术的关键是保证进入空气的高度无菌性，因此必须选择孔径小、材料先进的过滤膜。一般细菌的直径为0.55um，酵母的直径为110um，病毒的直径一般为20400m，因此在选择滤膜时应综合考虑以上因素。当然，如果选择太小，成本会大大增加。另外，环境对空气的影响也很大，因此必须保持空压机房和种子生产车间的环境清洁。

3. 培养基

培养基是菌丝生长发育的营养源，需要全面均衡的营养。不同的菌株有不同的营养需求。配制原料包括糖、麸皮、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素、蛋白胨、马铃薯汁、酵母膏等。配制培养基时，将马铃薯片和麸皮一起煮熟，滤出汁液，然后加入其他辅料拌匀。

4. 疫苗接种

培养箱上端有接种口，也是加料口。结合母种和加入抑菌剂后，必须在火焰圈的保护下倒入槽内，要求操作快速准确。

5. 环境

环境对菌株的产生有很大的影响。过滤器本身不可能100%过滤掉杂菌。减少环境中杂菌的数量非常重要。只有形成对杂菌的生长优势，才能抑制杂菌的感染。也就是说，液体培养不是建立在绝对无菌的前提下，相反，它是建立在相对无菌的前提下。从这个意义上讲，保持环境清洁，减少空气中的细菌数量，对于提高菌株培养的成功率具有重要意义。

2、液态菌的生产工艺

流程图：

空气压缩 过滤

配料罐装杀菌冷却接种栽培液种

试管斜种三角瓶液体专用母种

1、试管菌的制作：液态菌对试管的纯度要求很高。生产前，试管种子必须经过纯化，否则很难生产出液体种子。提纯方法有固体种生产法和菌种提纯法两种。您可以选择两者之一。

2、三角瓶液体菌种专用母种的制作：专用母种分为固体和液体两种。从生产工艺上看，生产液体专用母种难度较大，采用电磁搅拌器生产。整个过程需要7天，生产出来的液体稍加处理就可以直接使用。固体种的生产时间较长，贮存时间也较长，运输方便。两种疫苗的效果是一样的。

3、发酵罐制作

生产时，应先配制培养基。配料时，先将土豆去皮切片，拌入麸皮，放入不锈钢锅中煮熟取汁，然后将辅料KH2PO4、MgSO4等溶解，拌匀，放入罐中并加热，125保温40分钟左右灭菌，灭菌结束后用冷水冷却至培养温度，将合并后的三角瓶连接起来进行培养，期间根据不同菌种设定合适的温度文化。

培训期间应注意并做好记录。包括温度、压力、气流、废气气味等。停电时，排气阀自动关闭或手动关闭，使罐体保持正压状态。通电重启，打开排气阀继续培养。培养过程中可随时进行无菌取样分析，待菌球密度适宜（用视液镜观察）数日后进行接种。